CRISPR/Cas9系统利用sgRNA/Cas9复合体识别并在DNA特异位点造成双链断裂,利用细胞自身修复机制或者与外源DNA同源重组实现基因敲、敲入和序列突变。使用CRISPR技术可以稳定地从靶细胞中敲除目的基因,即使用一对靶向目的基因的gRNA和Cas9表达载体共同导入靶细胞,从而在目的基因上造成两个切口。细胞尝试修复切口的过程将导致两个切口间的序列的大片段删除。切口在基因上的位置经过专门优化,以使基因片段被敲除后可最大程度地失活目的基因。
根据不同的细胞类型,我们选择CRISPR慢病毒载体或者质粒载体进行基因敲除。最终的细胞株将通过Sanger测序以确定目的基因靶区域被敲除。此外,发货前的细胞也会经过无菌测试、支原体检测等QC检验。
技术优势:
操作简单,靶向精确性更高;
可实现对多个靶基因位点或多个靶基因的同时敲除/敲入/突变;
适用于人、大鼠、小鼠以及部分其他哺乳动物等各种细胞系的靶向敲除/敲入/突变。
服务流程:
