Calcein AM是一种能渗透细胞的染料，可用于测定大多数真核细胞的活力。Calcein AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，由于它在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。在活细胞中，细胞质内的酯酶水解乙酰氧甲酯之后，非荧光的钙黄绿素 AM 转化为绿色荧光钙黄绿素 。与其它同类试剂相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。Calcein不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。使用了Calcein的活性检测的实验结果是十分可信并   且与标准的51Cr-释放法所得结果相一致的。Calcein的激发和发射波长分别为494 nm和515 nm。Calcein AM可与PI结合使用，分别对活细胞和死细胞染色，可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。

产品参数：

激发和发射波长:494/515 (after cleavage)

运输条件:冰袋运输

存储条件:-20ºC,避光

分子式:C45H45N2O23

分子量:994.87

CAS 号:148504-34-1

染色原理：

实验步骤：

1. 用1 ml无水DMSO溶解1 mg Calcein AM，制备成1 mmol/l的Calcein-AM母液，-20℃下密闭冷冻保存。

2. 用PBS或DMSO将Calcein AM母液稀释制成1-50 µM的Calcein AM溶液(现配现用)。

3. 吸掉预培养好的细胞中的培养基，用合适的缓冲液清洗2-3次。

4.加入适量的Calcein AM溶液， 在37℃培养细胞15-30分钟。

5. 用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

6. 用494 nm激发波长，515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。如果Calcein AM很难进入细胞，可以使用表面活性剂。

案例分析：

注意事项：

1、试剂容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，开封前，请轻弹管壁几次，以保证粉末落入管底。

2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。

3、溶解液 DMSO 需要保证新鲜无水，否则将会导致 AM 体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。

4、母液遇水极易分解，如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成 5 μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。

5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、染色试剂的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。