由于某些 AM 酯在水溶液中不溶解,低毒性的Poloxamer常常被用于促进细胞加载染料。这种非离子型的去污剂在 DMSO 中的终浓度可达到 20%(w/v)。有时在制备染色储备液时,也会用到Poloxamer,40℃温和加热可以协助Poloxamer溶于 DMSO,但 Poloxamer可以降低 AM 酯的稳定性,所以,建议最好仅在工作液中使用Poloxamer。
通常情况下,溶于 DMSO 的、浓度为 1–5 mM 的 AM 酯在使用前,会与终浓度为20%(w/v)的Poloxamer储备液按 1:1 的比例混合均匀。然后将混合后的液体加入到细胞缓冲液中以孵育细胞,使 AM 酯的终浓度为 1 μM 至 10 μM 之间,孵育时间为 10 分钟至 1 小时不等(孵育时的温度会影响细胞内染料的扩散速率)。孵育完成后,需要用新鲜的培养基清洗细胞,以进行下游的实验。
注意事项:
Poloxamer的终浓度通常不超过 0.1%。但是,对于较弱的荧光染料,如 SBFI AM,PBFI AM,quin-2 AM 和 Fura Red AM 等,可能需要较高浓度的Poloxamer。