DiI 即 DiIC18(3)，全称为 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI 和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中，最大激发波长为 549nm，最大发射波长为 565nm。

长链二烷基碳菁类染料，特别是 Dil，被广泛应用于细胞及组织的染色，进行顺行或逆行的神经元示踪分析。Dil 不会影响细胞的活力，生长以及基本的生理特性。用 Dil 标记的运动神经元，在培养基条件下持续跟踪时间可长达四周，在体内长达一年。在经过固定处理的样品中，染料在质膜中以 0.2~0.6mm/天的速度缓慢横向扩散均匀标记神经元；在活体组织中扩散速度可达到 6mm/天。经过醛类试剂固定的组织，Dil 的扩散可持续两年。一般情况下，除非细胞膜（例如切片部位）被破坏，未标记的染料不会向非标记的细胞转移。

产品参数：

激发/发射波长：550/565nm

运输条件：常温

储存条件：20℃，避光

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

CAS号：41085-99-8

实验步骤：

制备储存液

将固体染料溶于DMF或DMSO或乙醇配制为1mM的储存液。对于DiO (MW 882)，优选DMF作为溶剂。配制好的储存液，在避光-20°C的条件下至少可以保存6个月。

悬浮细胞的染色

1 用将细胞以 1 × 10^6/mL 的密度悬浮于无血清培养基中；

2 每 1mL 细胞悬液加入 5µL 细胞染色液，混匀；

3 37℃孵育 1~20 分钟。不同类型的细胞孵育条件不一样，可参考表格 1.初始孵育时间可选择20 分钟，然后再进行优化；

4 将孵育后的细胞悬液 37°C，1500rpm 离心 5 分钟；

5 弃去上清，用 37°C 的培养基轻轻悬浮细胞；

6 重复以上洗涤步骤两次；

7 放置 10 分钟后测定荧光信号。

贴壁细胞的染色

1 放置干净的载波片在培养皿内，让细胞爬片生产至合适浓度；

2 取出爬片，用吸水纸从边缘轻轻吸去多余的培养基，然后将爬片放置于湿盒内；

3 配制染色液：每 1mL 培养基加入 5µL 细胞染色液；

4 用移液器吸取 100µL 步骤 2.3 中配制好的染色液，从边角处加入爬片，轻轻摇动使所有染色液覆盖整个爬片；

5 将爬片置于 37°C 孵育，不同类型的细胞孵育的时间不尽相同（参考表 1）；对于未在表中列出的细胞类型，建议孵育时间设为 20 分钟，然后再进行优化以获得均一的染色效果；

6 吸去染色液，加入温育过的培养基孵育 10 分钟，重复此洗涤步骤三次。

案例分析：